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第一百零九期 采用TSKgel色譜柱分析保健食品中免疫球蛋白IgG

2018年07月31日source:管理員
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IgG是免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,IgG)的縮寫,是血清主要的抗體成分,約占血清Ig的75%。其中40~50%分布于血清中,其余分布在組織中。IgG是唯一可以通過胎盤的免疫球蛋白。IgG的功能作用主要在機體免疫中起保護作用,大多數抗菌、抗病毒;應對麻疹、甲型肝炎等,能有效地預防相應的感染性疾病。免疫球蛋白分為五類,即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。


? ? ? 免疫球蛋白IgG,目前已作為功效成分添加于保健食品中,該成分對于增強免疫力、調節動物體的生理功能和某些特定物質的代謝等均有一定效果。

? ? ??食品安全國家標準GB/T 5009.194-2003中的IgG檢測法,是根據高效液相親和色譜的原理,在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白IgG與配基連接,在pH 2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。?

? ? ?下文中采用了日本東曹公司的親和色譜柱 TSKgel Protein A-5PW,參照GB/T 5009.194-2003,對初乳素樣品中的IgG含量進行了分析。

? ? ? TSKgel Protein A-5PW 是一款親和色譜分析柱,在多孔親水性的聚合物基質填料表面鍵合了重組Protein A官能團。

表一 ?TSKgel Protein A-5PW色譜柱參數表

孔徑

100 ?nm

粒徑

20 ?μm

官能團

重組Protein ?A








? ? ? ??色譜柱:TSKgel ProteinA-5PW (4.6 mmI.D.×3.5 cm)
? ? ? ??流動相A:pH 6.5, 0.05 mol/L磷酸鹽緩沖液
? ? ?? ? ???流動相B:pH 2.5, 0.05 mol/L甘氨酸鹽酸鹽緩沖液
? ? ?? ? ?? 流速:0.4 mL/min
? ? ?? ? ?? 柱溫:35 ℃
? ? ? ? ? ??進樣體積:20 μL
? ? ?? ? ?? 檢測器:UV 280 nm

表二 梯度洗脫表

時間(min

流速(ml/min

A%

B%

梯度

0

0.4

100

0

-

4.5

0.4

100

0

6

5.5

0.4

0

100

6

15.0

0.4

0

100

6

15.5

0.4

100

0

6

22.0

0.4

100

0

6




表三 采用TSKgel ProteinA-5PW 色譜柱分析初乳素中IgG樣品峰參數結果

編號

名稱

保留時間(min

理論塔板數

分離度

2

IgG

9.08

35565

18.99

?

分析結果表明,IgG與前面雜質峰的分離度Rs為18.99,兩次進樣測定結果的算數平均差值與算術平值比值為0.26%,完全滿足國標中規定的檢測要求。

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