一、單抗的概念
一種抗體分子是由一個B 淋巴細胞分化增殖而形成的漿細胞系產(chǎn)生的。由一個細胞增殖而形成的具有相同遺傳特征的細胞群叫做“克隆”。由一個漿細胞大量增殖形成的克隆產(chǎn)生的抗體稱單克隆抗體（Monoclonal antibody，McAb），簡稱單抗。這種抗體分子組成均勻，特異性單一。用雜交瘤技術制備出來的單克隆抗體純度高、專一性強、效價高。
二、層析工藝的確定
各種模式中，Protein A親和層析法可獲得高純度的單抗，因此普遍用于初始純化步驟（即初期捕獲）中。離子交換層析法 ( IEC ) 的高載量特點也使之在抗體的制備純化中被廣泛采用。疏水相互作用層析法 ( HIC ) 具有去除抗體多聚體以及脫落的蛋白 A 配體等雜質(zhì)的性能。混合模式層析法（MXC，含羥基磷灰石類分離介質(zhì)）也被運用到了抗體的層析純化工藝之中。
三、層析填料的選擇
聚合物基質(zhì)具有一定的疏水性，非特異性吸附低，回收率高；剛性好，高流速下柱床體積穩(wěn)定，易于工業(yè)放大使用。
分離模式 | 特長及用途 | 層析填料 |
親和層析（AFC） | 專為單克隆抗體的分離純化而設計的親和層析填料，是目前比較主流的用于捕獲階段的層析模式。 | 推薦型號： TOSOH聚合物基質(zhì)： Toyopearl AF-rProtein A -650F， Toyopearl AF-rProtein A HC-650F 參考型號： GE瓊脂糖基質(zhì)： rProtein A Sepharose FF，nProtein A Sepharose 4FF MabSelect，MabSelect SuRe |
離子交換（IEC） | 去除抗體中的多聚體，以及一般蛋白、血漿蛋白、病毒、疫苗等生物大分子樣品的分離純化。 | 陽離子交換 推薦型號： TOSOH聚合物基質(zhì)： Toyopearl GigaCap S-650M，Toyopearl MX-Trp-650M 參考型號： GE瓊脂糖基質(zhì)：Capto S |
陰離子交換 推薦型號： TOSOH聚合物基質(zhì)： Toyopearl GigaCap Q-650M，Toyopearl NH2-750F 參考型號： GE瓊脂糖基質(zhì)：Capto Q，Capto adhere | ||
疏水相互作用（HIC） | 去除抗體中的多聚體 | 推薦型號： TOSOH聚合物基質(zhì)： Toyopearl PPG-600M，Butyl-600M，Phenyl-600M 參考型號： GE瓊脂糖基質(zhì)：Phenyl Sepharose 4FF |
四、層析設備的選擇
選用Contichrom層析系統(tǒng)，可運行多種層析模式，如標準批處理過程、Capture SMB、MCSGP（多柱逆流溶劑梯度純化）、N-Rich等，可使層析填料、緩沖液等成本投入大為節(jié)省，同時也使得純化周期大為縮短。
Capture SMB應用于Protein A捕獲環(huán)節(jié)，采用連續(xù)上樣，可保證填料利用率最高，填料用量節(jié)省50%，從而使得成本投入大為縮減。
MCSGP工藝應用于去除降解物和聚合體的精純環(huán)節(jié)，可將含有不純組分的產(chǎn)品回收在一個封閉的環(huán)內(nèi)，進行循環(huán)式的層析操作，從而最大限度地提取純產(chǎn)品，使得收率和純度二者兼得。
Contichrom系列產(chǎn)品線齊全，具有可滿足高壓制備的規(guī)格，最高系統(tǒng)耐壓為100 bar（10 MPa），也具有為工業(yè)層析分離設計的產(chǎn)品，實現(xiàn)工藝的有效線性放大。
五、單抗HPLC分析中色譜柱的選擇
分離模式 | 分離原理 | 特長及用途 | 推薦色譜柱 |
尺寸排阻（SEC） | 分子的空間尺寸 | 單抗分子量通常在150kDa左右。適用于抗體的單體與多聚體（二聚體以上）的分離，或者單體與抗體降解產(chǎn)物的分離。有時也可將2根色譜柱串聯(lián)使用。 | TSKgel SuperSW mAb HTP TSKgel SuperSW mAb HR TSKgel UltraSW Aggregate TSKgel G3000SWXL TSKgel SuperSW3000 |
離子交換（IEC） | 分子的離子性 | 抗體純化產(chǎn)物中，即使是分子量相同的組分也可能存在電荷異構體（脫酰胺化、末端氨基酸突變）和糖鏈構造異構體等雜質(zhì)。此類色譜柱采用了非多孔類填料，可以獲得高分辨率、快速的分析。 | TSKgel CM-STAT TSKgel SP-STAT TSKgel Q-STAT |
疏水相互作用（HIC） | 分子的表面疏水性 | 在抗體藥物中，對于一些由于等電點相同而無法通過離子交換色譜法實現(xiàn)分離的、但表面疏水性有差異的結構同分異構體、二聚體和多聚體等，可以考慮使用HIC實現(xiàn)分離。 | TSKgel Butyl-NPR TSKgel Phenyl-5PW |
反相（RPC） | 分子的疏水性 | 適用于分析還原后的抗體重鏈輕鏈以及其他的降解產(chǎn)物。 | TSKgel Protein C4-300 |
親水相互作用（HILIC） | 分子的親水性 | 適用于分析結合在抗體上的糖鏈的結構差異性。 | TSKgel Amide-80 TSKgel NH2-100 |
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