尺寸排阻色譜法（SEC）是在非變性條件下分析蛋白質、單克隆抗體，包括：片段、單體及聚集體的公認方法。數十年來，TSKgel SW 系列色譜柱一直是業內生物治療藥物SEC分析的主力產品。TSKgel?UP-SW3000-LS 色譜柱是這一著名色譜柱系列中的新成員。
TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱分辨率高、峰形銳利，開發的方法高效、穩健、重現性強，且易于在 UHPLC和HPLC系統方法間轉移。在與高級檢測器聯用時，該UHPLC色譜柱可顯著降低噪音水平、縮短平衡時間及提高數據質量。
TSKgel UP-SW3000-LS | |
分離原理 | 尺寸排阻（SEC） |
基材 | 二醇基鍵合硅膠 |
粒徑 | 2μm |
孔徑 | 250? |
色譜柱材質 | 不銹鋼 |
色譜柱尺寸 | 4.6×300mm和4.6×150mm，有配套保護柱 |
分離范圍 | 10kDa~500kDa（下圖2） |
應用范圍 | 生物治療藥物的MALS和MS分析（下圖1） |
圖1?TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱與高級檢測器 SEC 聯用分析
圖2?TSKgel UP-SW3000-LS 的校準曲線
近來，單克隆抗體衍生的雙特異性或多特異性生物分子受到越來越多的關注。由于低分子量雜質和高分子量雜質的增加，使這些生物分子可能變得更加復雜。因此，需要更高級的檢測方法，如：MALS或質譜法來表征這些復雜的樣品。TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱正是為與高級檢測器聯用分析而設計的UHPLC色譜柱。針對多角度光散射（MALS）應用時，低噪音水平意味著高信噪比和檢測靈敏度提升。針對質譜應用時，低柱流失可增加電噴霧離子化效率，增強整體MS的性能和設備正常運行時間。 ?
TSKgel UP-SW3000-LS 如何在 MALS和MS應用中實現低噪音
TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱的主要特點是噪音更低，如圖3A 所示。LenS3多角度光散射檢測器采集的小角度信號數據顯示該色譜柱柱流失水平非常低。
為了便于比較，將流動相進樣到三種不同的色譜柱，TSKgel UP-SW3000-LS 色譜柱（圖 3A）、競品光散射專用色譜柱（圖3B）和生物制藥分析用 UHPLC 色譜柱（非Tosoh產品，圖3C）。結果表明，TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱尖峰最少、噪音水平最低。
圖3 MALS應用下HPLC和UHPLC色譜柱的比較
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圖 4 所示為質譜應用時柱流失情況。圖中顯示的平衡期間和進樣流動相后的累積強度 代表柱流失情況。TSKgel UP?SW3000-LS柱“流失” 信號最低，結果取自20分鐘一次的平衡周期。
圖4 ESI-MS 應用下HPLC和UHPLC色譜柱的比較
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批間重復性和柱壽命
如圖5所示，TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱不僅能夠同時兼容MALS和MS檢測，而且批間重復性高。如表1所示，柱壽命>500次進樣（測試期間歇性停泵）進一步證實了這一點。這些特點使該色譜柱成為復雜生物治療分子高效、可靠分析的選擇。
圖5 TSKgel UP-SW3000-LS 的批間重復性
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進樣 | 洗脫時間（min） | 洗脫時間變化（%） | 理論塔板數（%） | TP變化（%） |
1 | 12.464 | 100.0 | 55748 | 100.0 |
101 | 12.448 | 99.9 | 56343 | 101.1 |
201 | 12.455 | 99.9 | 56064 | 100.6 |
301 | 12.460 | 100.0 | 56055 | 100.6 |
401 | 12.443 | 99.8 | 55792 | 100.1 |
500 | 12.443 | 99.8 | 55792 | 100.1 |
表1 色譜柱壽命?
上表是單根TSKgel UP-SW3000-LS色譜柱上重復進樣抗體，進樣100次后，停泵6小時。繼續進樣抗體前，采用對氨基苯甲酸作為樣品來測試色譜柱柱效（洗脫時間和理論塔板數）。
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訂購信息
貨號 | 描述 |
023546 | TSKgel UP-SW3000-LS 2μm 4.6×300mm |
023547 | TSKgel UP-SW3000-LS 2μm 4.6×150mm |
023548 | TSKgel guardcolumn UP-SW-LS?4.6×20mm |
023549 | TSKgel guardcolumn UP-SW-LS?DC 4.6×20mm |
