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第139期 核酸類藥物層析純化的新選擇----疏水層析的應(yīng)用

2021年04月01日來源:管理員
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? ? ?核酸(Nucleic Acids)是一種生物大分子,包括脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。這兩類分子在生物體內(nèi)的主要作用是攜帶和傳遞遺傳信息。這兩類分子能夠用于疾病的預(yù)防、診斷和治療的,就是核酸藥物。

傳統(tǒng)的藥物以化學(xué)小分子為主,近二十年來以抗體和細(xì)胞藥物為代表的生物藥物也得到了廣泛的認(rèn)可,而區(qū)別于這兩類藥物的新一代核酸藥物即將成為藥物研發(fā)的主流。核酸藥物能夠以化學(xué)藥物或抗體藥物無法靶向(例如mRNAmiRNA)的分子作為作用靶點(diǎn),有望對傳統(tǒng)藥物療效不佳的疾病產(chǎn)生突破性的進(jìn)展,特別是難以治療的遺傳疾病、癌癥以及某些病毒感染(例如SARS-CoV-2)。諾華、默沙東、輝瑞制藥、藥明康德等多家藥企在該領(lǐng)域進(jìn)行了重要的布局。

目前,全球已經(jīng)有12種核酸藥物獲批上市,預(yù)計(jì)今后每年也將有34種核酸藥物獲批。另外,預(yù)計(jì)到2025年,核酸藥物的市場規(guī)模將達(dá)到1百億美元 。作為主流核酸藥物的合成寡核苷酸,在經(jīng)過固相法或液相法的化學(xué)合成工藝后,通過反相層析(RPC)或離子交換層析(IEC)等方法進(jìn)行分離和純化。但是,普通RPC工藝無法完全去除目標(biāo)產(chǎn)物中的相關(guān)雜質(zhì),而且由于大量使用有機(jī)溶劑,需要進(jìn)行廢液處理、配備防爆設(shè)備等,會產(chǎn)生對成本控制不利等因素。因此,相關(guān)人員正在研究使用可代替RPC的層析工藝 —— 疏水層析(HIC)。

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一、???疏水層析的優(yōu)勢(與RPC相比)

1.?????? 可以去除固相合成時(shí)從固相導(dǎo)出的樣品溶液中含有的氫氧化銨等低分子。

2.?????? 合成過程中,保護(hù)基二甲氧三苯甲基(DMT)與目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合的DMT-on目標(biāo)物,與保護(hù)基脫落生成的DMT-off雜質(zhì)更容易被分離。

3.?????? 可以分離目標(biāo)產(chǎn)物的相關(guān)雜質(zhì),即N-1雜質(zhì)、N+1雜質(zhì)、P=O雜質(zhì)、氰乙基化(CNEt)雜質(zhì)、無堿基雜質(zhì)等。

4.?????? 使用酸性洗脫液,可在柱內(nèi)完成目標(biāo)產(chǎn)物的脫三苯甲基化(DMT基團(tuán)的脫保護(hù))。

5.?????? 聚合物基質(zhì)的填料可使用堿性溶液(pH13以下),還可用NaOH溶液對層析柱進(jìn)行CIP清洗。

由于洗脫液幾乎不使用有機(jī)溶劑,所以無需配備防爆設(shè)備,還可減少廢液處理的費(fèi)用。

二、?使用HIC填料進(jìn)行合成寡核苷酸的純化精制工藝示例

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? ?三、使用HIC層析填料分離合成寡核苷酸的實(shí)例

222222.png


從上述各種類型的HIC填料分離粗純的寡核苷酸的結(jié)果來看,DMT-off雜質(zhì)在所有的HIC填料上均無法被吸附,而是直接流穿。另外,從目標(biāo)產(chǎn)物的洗脫位置、與雜質(zhì)的分辨率(分離度)來看,TOYOPEARL Phenyl-650MButyl-650M更適用于寡核苷酸的純化。


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