第131期 杜邦樹脂在多肽純化中的應用

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目前市場上有超過60種美國食品藥品管理局（FDA）批準的多肽藥物，該數量有望顯著增長；目前約有140種多肽藥物正在進行臨床試驗，有超過500種治療性多肽處于臨床前開發階段。多肽可以通過化學合成（固相或液相）或通過基因重組法生產。在這兩種方法中，聚合物吸附樹脂（如AMBERCHROM CG 和 XT 系列）可用于捕獲和拋光步驟。????? ??????????AMBERCHROM 產品與硅膠色譜產品相比，具有明顯優勢，因為該產品可使用苛性堿（1M NaOH，在60℃）進行在位清洗和消毒。這也意味著可以對生產設備進行全面清潔和消毒，從而防止產品殘留或內毒素和病毒污染。AMBERCHROM 產品在任何pH值的任何溶劑中均能保持穩定，并具有出色的機械穩定性。

為提取和純化生物制品，杜邦提供了針對各種應用條件的吸附樹脂填料，其具有不同的粒徑分布、表面積、孔結構、疏水性和穩定性等：

? 酸/苛性堿pH范圍為1-14

? 有機溶劑

? 過氧乙酸、弱氧化劑

? 蒸汽滅菌

這些產品在堿液原位清洗過程中能保持穩定，是二氧化硅層析產品的有效替代品。

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寡核苷酸

盡管寡核苷酸市場仍然相對較小，但快速增長的分子診斷領域將提高對合成寡核苷酸的需求。寡核苷酸是DNA或RNA聚合物，用于研究、基因治療、以及分子診斷和法醫學用途的DNA或RNA檢測探針。寡核苷酸可以通過化學或酶法合成。

? 在固相和液相合成中，每個核苷酸偶合到鏈上，直到形成所需序列。合成通常在18到40個循環之間，最常見的長度大約為21個。在每個偶合循環中，少數寡核苷酸的鏈不會延伸，從而產生全長產物（n）和缺失序列的混合物。

? 在酶法合成中，聚合酶可以復制小序列DNA，從而合成全部序列。該方法比化學合成法能得到更高純度的寡核苷酸。

寡核苷酸純化是指從所需的全長序列中去除缺失序列的過程。反相層析法是最佳分離方法，因為該方法利用了含有5'-DMT基團（DMT= 4,4'-二甲氧基三苯甲基）的全長產物和缺失序列（無DMT基團）之間疏水性的差異。全長DMT寡核苷酸可以保留在樹脂柱上，而缺失序列則被洗掉。AMBERCHROM樹脂可用于脂質體結合寡聚核苷酸和聚乙二醇適配子的純化。

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胰島素

胰島素主要用于治療I型糖尿病、孕婦糖尿病和糖尿病酮癥酸中毒。全球糖尿病患者超過4.5億，每年有170萬人死于該疾病。治療中使用的胰島素最初是從豬或牛胰腺中提取的。隨后，通過化學和酶工藝轉化豬胰島素，或通過采用重組DNA技術的細菌合成，源自動物的胰島素被人源胰島素所取代。現在，人們通過某些氨基酸和作用動力學的差異來區分人胰島素及其類似物（如：賴脯胰島素、門冬胰島素、甘精胰島素）。純人胰島素的好處，在于降低了抗體形成的風險。如今，胰島素主要使用重組DNA技術在酵母[釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）]或細菌（大腸桿菌）表達體系中生產。在收獲胰島素原，澄清發酵液，復性和酶切后，AMBERCHROM CG300M 和 XT30 或 XT20 可用于反相層析，將胰島素與各種雜質（包括A21脫酰胺-胰島素等類似物）分離。

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胰高血糖素樣肽（ GLP-1）

胰高血糖素樣肽 （GLP-1） 可用于 II 型糖尿病的治療；在糖尿病患者體內，碳水化合物由于胰島素抗性或缺乏胰島素而不被代謝，導致血液中葡萄糖水平高。胰高血糖素樣肽-1（ GLP-1）是30個氨基酸長度的肽，能夠通過增強胰島素分泌，以葡萄糖依賴性方式降低血糖水平。胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）被認為是一種治療糖尿病的理想藥物。

AMBERLITE XAD1600N（ 一款二乙烯基苯聚合物吸附樹脂） 和 AMBERCHROM CG71M（一款具有增強親水性的不溶性脂肪族丙烯酸酯大孔吸附樹脂） 特別適合用于其純化步驟。

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降鈣素

降鈣素是一種由甲狀腺的濾泡旁細胞（通常稱為C細胞）在人體內產生的激素。降鈣素參與調節血液中鈣和磷酸鹽的水平，抵消甲狀旁腺激素的作用。降鈣素是32個氨基酸的線性多肽。它通過抑制破骨細胞來減輕骨吸收。降鈣素目前的適應癥是骨質疏松癥和骨關節炎。降鈣素通過重組 DNA 技術或化學肽合成技術生產。AMBERCHROM XT30 適合用于其純化步驟。

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